البنسيلامين
C5H11NO2S 149.21
د-فالين، 3-ميركابتو-.
d-3-ميركابتوفالين [52-67-5].
» يحتوي البنسيلامين على ما لا يقل عن 97.0 بالمائة ولا يزيد عن 102.0 بالمائة من C5H11NO2S، محسوبًا على الأساس المجفف.
التعبئة والتغليف والتخزين- يحفظ في أوعية ضيقة.
معايير USP المرجعية<11>-
USP بنسيلامين RS
USP البنسلين G البوتاسيوم RS
USP البنسيلامين ثاني كبريتيد RS
C10H20N2O4S2
تحديد الهوية-
أ: امتصاص الأشعة تحت الحمراء <197M> (50 مجم في 300 مجم).
ب: قم بإذابة 10 ملجم في 5 مل ماء، وأضف قطرة واحدة من هيدروكسيد الصوديوم 5 ن و 20 ملجم نينهيدرين: ينتج لون أزرق أو بنفسجي-أزرق على الفور.
ج: قم بإذابة 20 مجم في 4 مل من الماء، وأضف 2 مل من محلول حمض الفوسفوتونجستيك (1 في 10)، وقم بتسخينه حتى الغليان تقريبًا: يتم إنتاج لون أزرق غامق على الفور.
الدوران النوعي<781S>: بين 60.5 و64.5.
محلول الاختبار: 50 مجم لكل مليلتر، في 1.0 ن من هيدروكسيد الصوديوم.
الرقم الهيدروجيني<791>: بين 4.5 و5.5 في المحلول (1 في 100).
خسارة في التجفيف<731>- يجفف حوالي 100 ملغ، موزون بدقة، في زجاجة شعرية مغلقة في فراغ عند ضغط لا يتجاوز 5 مم زئبق عند 60 لمدة 3 ساعات: يفقد ما لا يزيد عن 0.5٪ من وزنه.
البقايا عند الاشتعال<281>: لا تزيد عن 0.1%، ويتم ترطيب البقايا المتفحمة بـ 2 مل من حمض النيتريك و5 قطرات من حمض الكبريتيك.
المعادن الثقيلة، الطريقة الثانية<231>: لا تزيد عن 0.002%.
حد نشاط البنسلين-
درجة الحموضة 2.5 عازلة- يُذاب 100 جم من فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة في الماء، ويُضاف 0.2 مل من حمض الهيدروكلوريك، ويُخفف بالماء إلى 1000 مل، ويُخلط. اضبط، إذا لزم الأمر، باستخدام حمض الفوسفوريك أو مع 10 ن من هيدروكسيد البوتاسيوم إلى الرقم الهيدروجيني 2.5.
إعداد قياسي- قم بالتحضير وفقًا لتوجيهات البنسلين G في الجدول 1 تحت المضادات الحيوية - المقايسات الميكروبية 81، باستثناء تحضير محلول المخزون النهائي الذي يحتوي على 100 وحدة Penicillin G لكل مليلتر وستة تخفيفات اختبار تتراوح من 0.005 وحدة Penicillin G لكل مليلتر إلى 0.2 وحدة Penicillin G لكل مليلتر، واستخدام جرعة متوسطة من معيار 0.050 وحدة Penicillin G لكل مليلتر.
التحضير للاختبار- قم بإذابة 1.0 جم في الماء لتكوين 18.0 مل، ثم انقل 9.0 مل من هذا المحلول إلى فاصل، وأضف 20 مل من أسيتات الأميل و1 مل من محلول pH 2.5، ثم قم بالرج. اسمح للطبقات بالانفصال، واسحب الطبقة المائية إلى فاصل ثانٍ، مع الاحتفاظ بمستخلص خلات الأميل في الفاصل الأول. التحقق من الرقم الهيدروجيني للطبقة المائية، وإذا كان أكبر من 3.0 ضبطه مع حمض الهيدروكلوريك إلى الرقم الهيدروجيني 2.5، واستخراج مع 20 مل من خلات الأميل. تخلص من الطبقة المائية، وأضف مستخلص خلات الأميل إلى الفاصل الأول. اغسل مقتطفات خلات الأميل المدمجة مع 10 مل من الرقم الهيدروجيني المخفف 2.5 المخزن المؤقت (1 في 10)، وتجاهل الطبقة المائية. استخرج خلات الأميل مع 10.0 مل من المخزن المؤقت رقم 1 (انظر محاليل الفوسفات والحلول الأخرى في قسم الوسائط والمواد المخففة تحت المضادات الحيوية - المقايسات الميكروبية 81). استخدم جزءًا من المستخلص المنظم كمحلول اختبار أ. إلى جزء 5 - مل من المستخلص أضف 0.1 مل من محلول البنسليناز، واحتضنه عند درجة حرارة 36 ​​إلى 37.5 لمدة 60 دقيقة (محلول الاختبار ب).
تحضير اللقاح- قم بالتحضير وفقًا لتوجيهات المضادات الحيوية - المقايسات الميكروبية 81، باستخدام Micrococcus luteus (ATCC 9341) ككائن اختبار، ولقاح يعطي مناطق تثبيط حادة واضحة يبلغ قطرها 17 مم إلى 21 مم مع مستوى الجرعة المتوسطة للمعيار.
الإجراء- تابع وفقًا لتوجيهات طريقة الأسطوانة-اللوحة تحت المضادات الحيوية-الفحوصات الميكروبية 81، باستخدام 10 مل من الوسط 1 للطبقة الأساسية و4 مل من الوسط الملقّح 4 لطبقة البذور، واحتضان الأطباق عند 29 إلى 31، باستثناء كل لوحة اختبار لملء أسطوانتين بمحلول الاختبار A، اسطوانتين بمحلول الاختبار B، واسطوانتين مع الجرعة المتوسطة للمعيار. إذا لم ينتج عن محلول الاختبار A منطقة تثبيط، يكون الاختبار سلبيًا للبنسلين. إذا كان محلول الاختبار A ينتج منطقة تثبيط ولم ينتج محلول الاختبار B منطقة تثبيط، فهذا يعني أن البنسلين موجود. حدد مستواه من المنحنى القياسي: لا يوجد أكثر من 0.01 وحدة Penicillin G في كل مل من محلول الاختبار A (0.2 Penicillin G Unit لكل جرام).
عطارد-
[ملاحظة-ثنائي ثيزونات الزئبق حساس للضوء. قم بإجراء هذا الاختبار في ضوء خافت.]
محلول مخزون ديثيزون- حل 40 ملغ ديثيزون في 1000 مل من الكلوروفورم.
معاير الديثيزون- تمييع 30.0 مل من محلول مخزون ديثيزون مع الكلوروفورم إلى 100.0 مل. يحتوي هذا المحلول على حوالي 12 ملغ من الديثيزون لكل لتر.
الحل القياسي- انقل 135.4 ملجم من كلوريد الزئبق إلى دورق حجمي سعة 100 مل، وأضف 0.25 ن من حمض الكبريتيك إلى الحجم واخلط. يحتوي هذا المحلول على ما يعادل 100 ملغ من الزئبق في 100 مل.
المحلول القياسي المخفف- صب 2 مل من المحلول القياسي في دورق حجمي سعة 100 مل، وأضف 0.25 ن من حمض الكبريتيك إلى الحجم واخلط. يحتوي كل مل من هذا المحلول على ما يعادل 20 ميكروغرام من الزئبق.
التقييس- قم بامتصاص 1 مل من المحلول القياسي المخفف في فاصل سعة 250-مل، وأضف 100 مل من حمض الكبريتيك 0.25 ن، و90 مل من الماء، و10 مل من محلول هيدروكلوريد الهيدروكسيلامين (1 في 5). ثم أضف 1 مل من محلول ثنائي الصوديوم (1 في 50)، و1 مل من حمض الأسيتيك الجليدي، و5 مل من الكلوروفورم، ورجها لمدة دقيقة واحدة، واتركها منفصلة، ​​وتخلص من طبقة الكلوروفورم. أضف إلى المحلول معاير ديثيزون، في أجزاء من 0.3 مل إلى 0.5 مل، من سحاحة 10-مل. بعد كل إضافة، قم برج الخليط 20 مرة، واترك طبقة الكلوروفورم تنفصل وتخلص منها. استمر حتى تظل إضافة معاير ديثيزون باللون الأخضر بعد الرج. احسب الكمية، بالميكروجرام، من الزئبق المكافئ لـ 1 مل من محلول معاير الديثيزون، وذلك بقسمة 20 على عدد مل من محلول معاير الديثيزون المضاف.
الإجراء- انقل 500 ملجم من البنسيلامين إلى دورق كلداهل سعة 650 مل يحتوي على عدد قليل من الخرز الزجاجي، وقم بإمالة الدورق بزاوية 45 تقريبًا، ثم أضف 2.5 مل من حمض النيتريك من خلال قمع صغير يوضع في فم الدورق. اسمح للخليط بالوقوف في درجة حرارة الغرفة حتى تتصاعد أبخرة أكسيد النيتروز ويهدأ التفاعل القوي (من 5 إلى 30 دقيقة). أضف 2.5 مل من حمض الكبريتيك من خلال القمع، وقم بتسخينه بلطف في البداية ثم لإنتاج أبخرة ثالث أكسيد الكبريت، ثم يبرد. أضف 2.5 مل من حمض النيتريك بحذر، ثم قم بتسخينه مرة أخرى لإنتاج أبخرة ثالث أكسيد الكبريت، ثم قم بتبريده. كرر المعالجة بحمض النيتريك والحرارة، ثم برد، وأضف بحذر 50 مل من الماء، واشطف القمع وجمع الشطف في القارورة. قم بإزالة القمع، وقم بغلي المحلول إلى ما يقرب من نصف حجمه (حوالي 25 مل)، ثم قم بتبريده إلى درجة حرارة الغرفة. انقله إلى فاصل سعة 250-مل بمساعدة الماء، وأضف الماء للحصول على حوالي 50 مل. أضف 1 مل من محلول ثنائي الصوديوم (1 في 50) و1 مل من حمض الأسيتيك الجليدي، واستخرجه بأجزاء صغيرة من الكلوروفورم حتى يظل مستخلص الكلوروفورم الأخير عديم اللون. تخلص من مستخلص الكلوروفورم، وأضف 50 مل من حمض الكبريتيك 0.25 N، و90 مل من الماء، و10 مل من محلول هيدروكلوريد الهيدروكسيلامين (1 في 5). أضف معاير ديثيزون، في أجزاء من 0.3 مل إلى 0.5 مل، من سحاحة 10-مل. بعد كل إضافة، قم برج الخليط 20 مرة، واترك طبقة الكلوروفورم تنفصل وتخلص منها. استمر حتى تظل إضافة معاير ديثيزون باللون الأخضر بعد الرج. احسب كمية الزئبق الموجودة: الحد الأقصى هو 10 ميكروجرام (0.002%).
حد ثاني كبريتيد البنسلامين-
المخفف، والمرحلة المتنقلة، وحل الحل-التحضير حسب توجيهات الفحص.
إعداد قياسي- قم بإذابة كمية موزونة بدقة من USP Penicillamine Disulfide RS في Diluent للحصول على محلول بتركيز معروف يبلغ حوالي 0.025 مجم لكل مليلتر.
التحضير للاختبار- استخدام إعداد الفحص.
النظام الكروماتوغرافي- المضي قدما وفقا لتوجيهات في الفحص. كروماتوغراف الإعداد القياسي، وتسجيل استجابات الذروة لثاني كبريتيد البنسيلامين وفقًا لتوجيهات الإجراء: الانحراف المعياري النسبي للحقن المكرر لا يزيد عن 2.0%.
الإجراء- [ملاحظة-استخدم مناطق الذروة حيث تتم الإشارة إلى استجابات الذروة.] قم بحقن كميات متساوية (حوالي 20 ميكرولتر) من المستحضر القياسي وإعداد الاختبار بشكل منفصل في الكروماتوغراف، وسجل المخططات اللونية، وقم بقياس الاستجابات لقمم ثاني كبريتيد البنسيلامين. احسب النسبة المئوية لثاني كبريتيد البنسيلامين (C10H20N2O4S2) في البنسلامين المأخوذ بالصيغة:
100 (CS / CU) (RU / RS)
حيث CS هو تركيز، بالمجم لكل مل، من USP Penicillamine Disulfide RS في الإعداد القياسي، CU هو تركيز Penicillamine، بالمجم لكل مل، في إعداد الاختبار، و rU و rS هما استجابات ذروة ثاني كبريتيد البنسيلامين التي تم الحصول عليها من إعداد الاختبار والإعداد القياسي، على التوالي: تم العثور على ما لا يزيد عن 1.0٪ من ثاني كبريتيد البنسيلامين.
مقايسة-
مخفف- قم بإذابة 1.0 جم من ثنائي الصوديوم الإيديتات في الماء للحصول على 1000 مل من المحلول.
المرحلة المتنقلة- قم بإذابة 6.9 جم من فوسفات الصوديوم أحادي القاعدة و0.20 جم من 1-هكسان سلفونات الصوديوم في الماء لتكوين 1000 مل من المحلول. ضبط مع حامض الفوسفوريك إلى الرقم الهيدروجيني 3.0 ± 0.1، وتصفية من خلال مرشح مناسب من 1 ميكرومتر أو المسامية الدقيقة. قم بإجراء التعديلات إذا لزم الأمر (راجع ملاءمة النظام ضمن الفصل اللوني<621>).
حل القرار- قم بإعداد محلول في مادة مخففة تحتوي على حوالي 1 ملغ من USP Penicillamine RS و 0.1 ملغ من USP Penicillamine Disulfide RS لكل مليلتر.
إعداد قياسي- قم بإذابة كمية موزونة بدقة من USP Penicillamine RS في Diluent للحصول على محلول بتركيز حوالي 1.25 مجم لكل مليلتر.
إعداد الفحص- انقل حوالي 125 ملجم من البنسلامين، وزنه دقيقًا، إلى دورق حجمي سعة 100 مل، ثم قم بإذابته في المخفف وتخفيفه حتى يصل إلى الحجم، ثم امزجه.
النظام الكروماتوغرافي (انظر الكروماتوغرافيا <621>)-تم تجهيز الكروماتوغرافيا السائلة بكاشف 210-نانومتر وعمود 3.9-مم × 30-سم يحتوي على التعبئة L1. معدل التدفق حوالي 1.6 مل في الدقيقة. تحليل كروماتوغرافي لمحلول القرار، وتسجيل الاستجابات حسب توجيهات الإجراء: أوقات الاستبقاء النسبية حوالي 0.7 للبنسيلامين و1.0 لثاني كبريتيد البنسيلامين، والقرار، R، بين ذروة البنسيلامين وقمة ثاني كبريتيد البنسيلامين لا يقل عن 3.0. كروماتوغراف الإعداد القياسي، وتسجيل الاستجابات وفقًا لتوجيهات الإجراء: الانحراف المعياري النسبي للحقن المتماثل لا يزيد عن 1.0%.
الإجراء- [ملاحظة-استخدم مناطق الذروة حيث تتم الإشارة إلى استجابات الذروة. ] بشكل منفصل حقن كميات متساوية (حوالي 20 ميكرولتر) من الإعداد القياسي وإعداد الفحص في اللوني، وتسجيل اللوني، وقياس الاستجابات للقمم الرئيسية. احسب الكمية بالملليجرام من البنسلامين (C5H11NO2S) في جزء البنسلامين المأخوذ بالصيغة:
100C (رو / آر إس)
حيث C هو التركيز، بالمجم لكل مليلتر، من USP Penicillamine RS في الإعداد القياسي، و rU و rS هما استجابات ذروة البنسيلامين التي تم الحصول عليها من إعداد الفحص والإعداد القياسي، على التوالي.